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     本項目屬于生物化工領(lǐng)域，涉及酶固定化以及利用固定化酶催化合成高附加值化合物S-腺苷蛋氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）。SAM是廣泛存在于生物體內(nèi)的一種重要代謝中間體，在體內(nèi)由L-蛋氨酸（L-Met）和三磷酸腺苷（ATP）經(jīng)SAM合成酶（S-adenosylmethionine synthetase）催化合成，SAM已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域。目前SAM的工業(yè)化生產(chǎn)方法是酵母菌發(fā)酵法，而體外酶促轉(zhuǎn)化法是目前研究的熱點。與發(fā)酵法相比酶法合成SAM具有生產(chǎn)周期短、底物轉(zhuǎn)化率高、純化工藝簡單、能耗低以及環(huán)境友好等優(yōu)點，更易于進行工業(yè)化生產(chǎn)以及降低SAM產(chǎn)品價格，從而使消費者從SAM生產(chǎn)技術(shù)進步中受益。因此，體外酶催化合成SAM具有廣闊的推廣應(yīng)用前景。 體外酶催化制備SAM的關(guān)鍵是獲得大量低成本的SAM合成酶，同時通過固定化技術(shù)提高SAM合成酶的穩(wěn)定性以及重復使用批次。基于以上分析，本項目構(gòu)建了能高效組成型表達SAM合成酶的基因工程菌，單位體積發(fā)酵液重組SAM合成酶活力比野生菌搖瓶培養(yǎng)提高了320倍，單位質(zhì)量菌體重組酶活力比野生菌提高了約60倍。通過包埋法對重組細胞進行固定化，然后使用固定化整細胞以三磷酸腺苷（ATP）和L-蛋氨酸為底物催化合成SAM，35 ℃反應(yīng)8 h SAM合成量達到10-12 g/L，底物轉(zhuǎn)化率達到95%以上。 同時也對重組SAM合成酶進行了一步純化，使用多種載體對SAM合成酶進行了固定化研究，最終選取氨基樹脂用于制備固定化SAM合成酶，固定化酶活力回收率達到76%，半衰期為15-20批次，具有優(yōu)良的操作穩(wěn)定性。將固定化酶用于SAM的催化合成，35 ℃反應(yīng)8 h 反應(yīng)液中SAM的累積量達到10.8 g/L，底物轉(zhuǎn)化率達到95%，通過陽離子交換層析對SAM進行純化，最終SAM的總收率達到70%。 本項目申請國家發(fā)明專利3項，已授權(quán)2項，發(fā)表相關(guān)論文十余篇，對酶法生產(chǎn)S-腺苷蛋氨酸的推廣應(yīng)用具有重要的意義。該專利技術(shù)已經(jīng)于2012年10月轉(zhuǎn)讓給企業(yè)并實施生產(chǎn)。2013年共生產(chǎn)和銷售S-腺苷蛋氨酸1500公斤，新增利潤112.5萬元，新增稅收16.9萬元。2014年新增銷售額570萬元，新增利潤142.5萬元，新增稅收21.4萬元。