成果簡(jiǎn)介
一、項(xiàng)目來源與背景
（一）項(xiàng)目來源：科技部、全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心、黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳黑龍江省馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系馬鈴薯病毒防控崗位項(xiàng)目。
（二）項(xiàng)目背景：馬鈴薯是第四大糧食作物，中國馬鈴薯種植面積最大，總產(chǎn)量最高，但是單產(chǎn)水平低；世界平均單產(chǎn)16.74噸/公頃，中國單產(chǎn)14.35噸/公頃，黑龍江省單產(chǎn)12.68噸/公頃，荷蘭單產(chǎn)41.67噸/公頃；中國和黑龍江省單產(chǎn)水平低于世界平均水平，距離發(fā)達(dá)國家單產(chǎn)水平相差更遠(yuǎn)。馬鈴薯單產(chǎn)水平低主要原因是馬鈴薯種薯質(zhì)量差，種薯質(zhì)量差原因是馬鈴薯種薯被馬鈴薯6種主要病毒（PVX.PVY.PLRV.PVS.PVM.PVA）侵染而退化，造成馬鈴薯脫毒種薯產(chǎn)量降低，質(zhì)量下降，一般可減產(chǎn)20%-30%，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)可達(dá)80%以上；許多生產(chǎn)馬鈴薯種薯公司、企業(yè)合作社、種植大戶沒有對(duì)已感染病毒的馬鈴薯種苗種薯進(jìn)行馬鈴薯主要6種病毒檢測(cè)，大多數(shù)企業(yè)馬鈴薯種薯質(zhì)量達(dá)不到國家標(biāo)準(zhǔn)；致使馬鈴薯種苗種薯質(zhì)量差；馬鈴薯單產(chǎn)水平低。
許多企業(yè)合作社不能進(jìn)行馬鈴薯病毒檢測(cè)主要原因是該企業(yè)不具備實(shí)驗(yàn)室病毒檢測(cè)條件能力，將樣品送到有資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)費(fèi)用較高。
目前國內(nèi)外通用檢測(cè)馬鈴薯病毒技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，技術(shù)水平高，不能廣泛地被每個(gè)馬鈴薯種薯種植者應(yīng)用；針對(duì)大多數(shù)馬鈴薯種薯企業(yè)、合作社都不能應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室技術(shù)監(jiān)控馬鈴薯種薯田質(zhì)量，為了讓病毒檢測(cè)技術(shù)普及到企業(yè)、合作社、種植大戶，每個(gè)馬鈴薯種植者都能在田間隨時(shí)監(jiān)控馬鈴薯病毒發(fā)生情況，為提高馬鈴薯種薯質(zhì)量產(chǎn)量做好保障。我們旨在研究一種可以遍應(yīng)用的靈敏、準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、成本低、快速檢測(cè)技術(shù)-低成本馬鈴薯6種主要病毒同步快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)技術(shù)。病毒檢測(cè)技術(shù)是提高馬鈴薯種薯質(zhì)量、單產(chǎn)水平、病毒防控最重要的手段；試紙條檢測(cè)是控制馬鈴薯質(zhì)量的方便快捷的唯一手段。能夠解決我國馬鈴薯種薯質(zhì)量差和馬鈴薯單產(chǎn)水平低問題。
二、技術(shù)原理及性能指標(biāo)
技術(shù)原理：這種新檢測(cè)技術(shù)是利用免疫層析技（immuno-chromatographic technology）、利用膠體金顆粒標(biāo)記抗體、利用硝酸纖維素膜的毛細(xì)作用，使待測(cè)物（抗原/抗體）沿膜表面向前運(yùn)動(dòng)，與檢測(cè)區(qū)標(biāo)記的捕獲物特異結(jié)合而聚集
顯色。
性能指標(biāo)：試紙條靈敏度高：試紙條的靈敏度是104倍。準(zhǔn)確性高：同一樣品試紙條檢測(cè)和ELISA檢測(cè)，結(jié)果一致。穩(wěn)定性好：在4℃、常溫條件保存 ，檢測(cè)線顏色不變。特異性強(qiáng)：同步檢測(cè)馬鈴薯6種主要病毒試紙條檢測(cè)6種馬鈴薯病毒時(shí)檢測(cè)線（T線）和質(zhì)控線（C線）均出現(xiàn)紅線；檢測(cè)健康樣品和其他侵染馬鈴薯的病毒時(shí)，只出現(xiàn)質(zhì)控線紅線，檢測(cè)線未出現(xiàn)紅線?？焖?檢測(cè)時(shí)間4-6分鐘；一個(gè)快速檢測(cè)試紙條可以同步檢測(cè)6種病毒；成本低；假陽性率低；憑借肉眼判斷結(jié)果。
三、技術(shù)的創(chuàng)造性與先進(jìn)性
項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)：
1）首次建立馬鈴薯6種主要病毒抗體與膠體金同步結(jié)合方法；確定馬鈴薯6種主要病毒與膠體金特異性結(jié)合、顯示點(diǎn)，有效解決了多種病毒間相互干擾關(guān)鍵技術(shù)問題；確立6種病毒在試紙條上的順序線；確定噴射金標(biāo)最佳濃度；檢測(cè)線T線和質(zhì)控線C線抗體濃度最佳濃度；確定低成本試紙條的最佳規(guī)格。
2)研制出同時(shí)檢測(cè)馬鈴薯6種主要病毒的試紙條，解決了馬鈴薯6種病毒同時(shí)檢測(cè)技術(shù)難題，靈敏度高、假陽性率低；降低了檢測(cè)成本，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。
3）制備同步快速檢測(cè)試紙條時(shí)更新了包被抗體的固相載體，利用NC膜、玻璃纖維膜代替常規(guī)技術(shù)（ELISA）聚苯乙烯微量反應(yīng)板。利用NC毛細(xì)作用，使待測(cè)物沿膜表面向前運(yùn)動(dòng)，與檢測(cè)區(qū)標(biāo)記的捕獲物特異結(jié)合顯色，4min-6min可判斷反應(yīng)結(jié)果，解決了常規(guī)方法2d出結(jié)果的問題。
4）利用膠體金標(biāo)記馬鈴薯病毒抗體，代替常規(guī)檢測(cè)技術(shù)（ELISA）中標(biāo)記馬鈴薯病毒抗體的堿性磷酸酯酶，解決了檢測(cè)結(jié)果假陽性率高的問題。
本項(xiàng)目研究的技術(shù)根據(jù)國家一級(jí)查新機(jī)構(gòu)查新的結(jié)果表明該項(xiàng)技術(shù)在國內(nèi)外沒有其他單位進(jìn)行過研究，是我單位研制的首創(chuàng)技術(shù)，是一項(xiàng)在國內(nèi)外領(lǐng)先的新技術(shù)。
查新結(jié)論：根據(jù)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技文獻(xiàn)信息中心（國家一級(jí)科技查新咨詢單位）的國內(nèi)外查新，查新報(bào)告的結(jié)論是本項(xiàng)目研究的內(nèi)容在所查國內(nèi)外文獻(xiàn)中未見他人相同報(bào)道。
四、技術(shù)成熟的程度，適用范圍和安全性
技術(shù)的成熟程度和適用范圍：該技術(shù)已獲得國家專利。該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)假陽性率低證、馬鈴薯無毒化育種、種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用、種薯定級(jí)、病毒綜合防控提供理論依據(jù)。
技術(shù)的安全性：主要風(fēng)險(xiǎn)，如果馬鈴薯脫毒種薯種植面積減少；控制馬鈴薯脫毒種薯質(zhì)量馬鈴薯病毒快速檢測(cè)試紙條的需求隨之減少。風(fēng)險(xiǎn)對(duì)策，隨著馬鈴薯脫毒種薯認(rèn)證制度的不斷完善，有合格證的種薯才能進(jìn)入馬鈴薯市場(chǎng)；這樣就要求每個(gè)馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)企業(yè)必須使用快速檢測(cè)試紙條監(jiān)控檢測(cè)本企業(yè)馬鈴薯種薯的質(zhì)量；
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